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1株克氏原螯虾摩氏摩根菌的分离鉴定及联合药敏试验
从患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株病原菌,通过对其生理生化特征鉴定、16S rRNA序列分析和进化树构建对分离株进行了鉴定;测定了分离株对20种抗菌药物的敏感性及抗菌药物与天然化合物联用后的协同抑菌作用。结果发现,该菌株的生理生化特征与摩氏摩根菌基本一致,进一步通过测序和进化树分析发现该菌株与摩氏摩根菌的基因相似度达到99%以上,因此该菌株鉴定为摩氏摩根菌。药敏试验发现该菌株对恩诺沙星、氟苯尼考和新霉素等7种药物高度敏感,对卡那霉素中等敏感,对多西环素、链霉素和四环素等12种药物耐药。此外,联合抑菌试验发现多西环素与二氢辣椒碱联用后具有协同抑菌作用。以上研究表明,本次从克氏原螯虾肝胰腺中分离的细菌为耐药性摩氏摩根菌,可选用氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素或二氢辣椒碱和多西环素的复方制剂进行治疗。
2023/10/10
泥蚶致病性哈维氏弧菌的分离与鉴定
自浙江发病泥蚶中分离到1株优势菌J14,采用人工感染试验、形态及生化特征分析、16S rRNA基因序列测定和药敏试验等方法,对该菌株进行鉴定并分析其相关特性。结果表明,菌株J14感染泥蚶的96 h半致死密度为7.74×106个/mL,对泥蚶具有较强的致病性。菌株J14为革兰氏阴性细菌,经硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基分离为黄色不发光菌落,结合生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株为哈维氏弧菌。毒力基因的携带情况显示,哈维氏弧菌J14可检测到群体效应调节基因luxR,毒力调控基因toxR,溶血素基因vhhA、vhhB,毒力相关基因toxS,几丁质酶基因chiA,丝氨酸蛋白酶基因7种毒力基因。药敏结果显示,哈维氏弧菌J14对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、杆菌肽4种药物不敏感,对红霉素、多黏菌素B中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素、复方新诺明等26种常用抗生素药物敏感。研究结果可为泥蚶弧菌病的防治提供参考资料。
泥鳅维氏气单胞菌的毒力基因与耐药特性分析
为查明海南和广东地区维氏气单胞菌的毒力基因携带率及耐药情况,从两个地区的6个泥鳅养殖场的46尾泥鳅中,采集肾脏、肝脏、皮肤溃疡部位等样品进行细菌的分离,通过形态与生理生化鉴定、gyrA管家基因序列分析筛选到20株维氏气单胞菌(海南源7株、广东源13株),并对其毒力基因、耐药基因和抗生素药物敏感性进行检测。结果显示:20株分离的维氏气单胞菌的形态特征和生理生化特性与《常见细菌系统鉴定手册》中的维氏气单胞菌一致;gyrA管家基因序列均与GenBank数据库中维氏气单胞菌具有90%~99%的同源性。在20株维氏气单胞菌中,气溶素、肠毒素、蛋白酶等毒力基因检出率高,其中气溶素基因和鞭毛蛋白基因检出高达100%,但热稳定肠毒素基因未检出;喹诺酮类以及磺胺类药物耐药基因检出率均为100%,而酰胺醇类、大环类酯类和林可霉素类药物耐药基因均未检测到。这20株维氏气单胞菌对甲氧苄啶、红霉素、诺氟沙星、氨苄西林和林可霉素等药物的耐受率达100%,对氨曲南、庆大霉素和头孢噻肟等5种药物具有高度敏感性。试验结果可为泥鳅养殖生产中维氏气单胞菌的防控提供参考。
斑点叉尾肠道及其养殖环境菌群结构分析
为探究健康斑点叉尾(鱼回)肠道及其与养殖池塘水体中菌群结构的关系,采用16S rDNA高通量测序方法和生物信息学分析手段考察其肠道和养殖水体中微生物群落组成和多样性。多样性指数分析结果表明,斑点叉尾(鱼回)肠道菌群丰度和菌群多样性均较养殖水体低。斑点叉尾(鱼回)肠道中有69.57%的运算分类单元与水体中一致,水体中优势菌群主要为变形菌门、放线菌门和蓝藻门,而肠道中的优势菌群为拟杆菌门、梭杆菌门和厚壁菌门,说明肠道和养殖水体中的优势微生物种群的组成和丰度无明显的相关性,肠道中菌群组成有一定的独立性,其优势菌群结构几乎不受养殖环境菌群的影响。PICRUSt预测细菌表型发现,斑点叉尾(鱼回)肠道中以厌氧菌和革兰氏阳性菌为主;从生物膜形成和致病潜力表型可知,肠道和水环境中均存在大量条件致病菌。试验结果表明,池塘养殖健康斑点叉尾(鱼回)肠道微生物中的优势益生菌主要为鲸杆菌属和拟杆菌属,平均相对丰度高达36.60%和15.82%。本试验将为斑点叉尾(鱼回)的健康养殖和益生菌的筛选提供理论依据。
复合益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响
为分析枯草芽孢杆菌和乳酸乳球菌制成的复合益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群结构和抗病力的影响,在饲料中添加复合益生菌后,通过对肠道微生物16S rDNA基因V3+V4区进行高通量测序,检测投喂益生菌后凡纳滨对虾肠道菌群结构变化,并利用副溶血弧菌对凡纳滨对虾进行攻毒试验,分析投喂益生菌与凡纳滨对虾抗病力之间的关系。结果显示:各组样本运算分类单元数量为393~872,第28、56天试验组凡纳滨对虾肠道菌群运算分类单元数量、Observed species、Chao1和Shannon指数均值均高于对照组;在门水平上,试验组和对照组凡纳滨对虾肠道微生物均以变形菌门、拟杆菌门和放线菌门为主,第56天,试验组放线菌门、厚壁菌门菌群比例高于对照组;在属水平上,第28、56天试验组中鲁杰氏菌属比例均大于对照组;与对照组相比,第28天试验组凡纳滨对虾肠道弧菌属、假交替单胞菌属比例较小,第56天试验组黏着杆菌属比例较小;主坐标分析(PCoA)和非加权组平均法(UPGMA)聚类分析发现,对照组第28天和第56天微生物群落较为接近,而与试验组第28天差别较大;副溶血弧菌攻毒之后,试验组凡纳滨对虾累计死亡率为(64.4±11.7)%,对照组为(81.1±5.1)%,投喂益生菌后凡纳滨对虾成活率平均提高16.7%。试验结果表明,投喂复合益生菌可以提高凡纳滨对虾肠道菌群的丰度和多样性,促进肠道有益菌生长,抑制条件致病菌增殖,在停喂益生菌28 d后仍能对肠道菌群结构产生持续影响,提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力。研究结果可为复合益生菌在养殖生产中的实际应用和制定投喂策略提供有益参考。
亚硝态氮对虾肝肠胞虫感染脊尾白虾的影响
亚硝态氮是诱发虾类暴发性疾病的重要因素之一。为探究亚硝态氮胁迫对脊尾白虾生长状况及体内虾肝肠胞虫携带量的影响,设置0.008、3.000、6.000、9.000、12.000 mg/L 5个亚硝态氮质量浓度试验组,跟踪测定3周内脊尾白虾的生长指标和虾肝肠胞虫载量的变化。试验结果显示,脊尾白虾存活率、体长增量和体质量增加率均随着亚硝态氮质量浓度的升高呈先升后降的趋势,其中亚硝态氮6.000 mg/L组达最大值,存活率、体长增量和体质量增加率平均值分别为29%、0.8 cm和35.33%。脊尾白虾虾肝肠胞虫的载量随亚硝态氮质量浓度的升高呈现先降后升的趋势,在6.000 mg/L组达到最低值,为4.4×103拷贝/mg。试验结果表明,6.000 mg/L的亚硝态氮可抑制虾肝肠胞虫的传播,进而对脊尾白虾生长有一定的促进作用,提高感染虾肝肠胞虫的脊尾白虾的存活率和养殖产量。
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